MLPA​ – Amplificação Multiplex de Sondas Dependente de Ligação

Visão Geral

Laudo & Resultados

Existem dois possíveis resultados que podem ser obtidos em um teste MLPA:

• Positivo (Patogênico e provavelmente patogênico): Um resultado positivo indica que uma deleção ou duplicação do gene foi identificada em associação com o fenótipo da doença estudada. Este cenário permitirá fornecer aconselhamento genético ou orientação pessoal sobre possíveis tratamentos médicos, progressão da doença, estratégias reprodutivas / de prevenção e potenciais implicações para outros membros da família.
• Negativo: Um resultado negativo indica que nenhuma deleção ou duplicação causadora de doença foi identificada no teste realizado. Isso não garante que o indivíduo seja saudável ou livre de outras doenças genéticas ou condições médicas. Além disso, um resultado negativo não descarta outra causa genética de doença nem elimina o risco para descendentes futuros. No entanto, se um resultado de teste negativo for obtido e a variante em questão for conhecida por estar presente em membros da família afetados, isso exclui o diagnóstico dessa doença genética na pessoa analisada. Um resultado negativo pode ser explicado por várias causas, incluindo conhecimento genético limitado e limitações associadas à metodologia utilizada.

Requisitos da Amostra

• Rotulagem incorreta pode levar à rejeição da amostra. As informações mínimas exigidas para identificar e aceitar uma amostra são: nome completo do paciente, data de nascimento, sexo e número do prontuário médico. 

 Para o Diagnóstico Pré-natal:  

• Um contato prévio entre clínica e laboratório é recomendado para planejar adequadamente o caso, os prazos de pré-natal e antecipar contratempos.
• A amostra de sangue materno deve ser enviada com todas amostras de produtos da concepção, CVS e Amniocentese.  

O formulário de ‘consentimento informado’ e a ‘requisição de teste’ (incluída no kit fornecido e disponível em instruções para envio de amostra) devem ser devidamente preenchidos e assinados pelo paciente e enviados com as amostras dentro da caixa de transporte ou por e-mail para o laboratório. A Igenomix disponibiliza todos documentos necessários para a coleta e transporte do kit apropriado para o nosso laboratório.

Metodologia

Limitações

MLPA não detecta

• Rearranjos cromossômicos balanceados.
• Deleções e duplicações teloméricas.
• Deleções e duplicações que estão fora do alvo das sondas MLPA usadas.
• Mutações pontuais, pequenas inserções e deleções.
• Sequencia de repetições ou mutações no DNA mitocondrial.
• A sensibilidade analítica e a especificidade do método MLPA são ambas de 99%. 

Podem ocorrer resultados falsos positivos ou negativos devido a variantes de sequência raras em regiões alvo detectadas por sondas MLPA. Uma mutação pontual ou polimorfismo na sequência detectada por uma sonda, que resulta na redução da eficiência de ligação da sonda, também pode causar uma redução na área relativa do pico. Portanto, as deleções de exon único detectadas por MLPA devem sempre ser confirmadas por outros métodos, como PCR multiplex ou sequenciamento.