Estudos de mosaicismo, análise de ploidia e endométrio fino são destaques Igenomix na ESHRE 2023

Como vem acontecendo sempre, especialistas do Grupo Vitrolife participam em peso com estudos científicos na ESHRE 2023. Foram enviados quase 50 para esta edição do Congresso da Sociedade Europeia de Reprodução Humana e Embriologia, que acontecerá na Dinamarca entre os dias 25 e 28 de junho. ESHRE é uma das principais referencias para a atualização dos profissionais do setor de medicina reprodutiva! Selecionamos para você 3 tópicos imperdíveis da #Igenomix no Congresso:

• O primeiro, apresentado pela assessora científica Daniela Lorenzi sobre os resultados de transferência de embriões mosaico de baixo grau realizados em 17 clínicas de fertilidade diferentes da Argentina.
• O segundo é uma apresentação oral do estudo realizado sobre análise de ploidias em embriões com fertilização anormal realizado na Igenomix Itália
• O terceiro, aborda a incidência significativa de deslocamento da janela de implantação em pacientes com endométrio fino.

 

O impacto do relato de mosaicismo de baixo grau em ciclos de PGT de acordo com o número de ciclos com pelo menos um embrião para transferência

Tema do pôster: (epi)genética reprodutiva, Número do pôster: P-726 Autores:

3. Lorenzi1, A. Dizon Bautista2, B. Munkherdene2, A. Muro2, V. Nguyen2, A. Akinwole2, R. Kayali2, M. Riboldi3. ^{1Igenomix, Laboratório, Buenos Aires, Argentina. 2Igenomix, Laboratório, Los Angeles, E.U.A. 3Igenomix, Gestão, São Paulo, Brasil.}

 Questão de estudo: Como o desmascaramento de embriões mosaico de baixo grau afetou o número de ciclos com um embrião para transferência para pacientes submetidas a testes genéticos pré-implantacionais? Resposta resumida: 5,4% dos ciclos de PGT-A que não resultariam em embriões para transferência, tinham um embrião em mosaico de baixo grau que poderia ser considerado para transferência. O que já se sabe: Antes da publicação das últimas recomendações práticas para o manejo de embriões em mosaico (2022), muitas clínicas de fertilidade solicitaram resultados de mosaico de mascaramento em relatórios PGT-A (embriões em mosaico foram relatados como aneuploides). Publicações recentes revelaram que embriões em mosaico de baixo grau apresentaram taxas de gravidez, taxas de nascidos vivos e taxas de aborto espontâneo comparáveis às de embriões euploides (Capalbo et al, 2022). Novas recomendações sugeriram que não é apropriado descartar embriões de mosaico baixo, pois eles tinham uma alta chance de resultar em um bebê saudável. Por isso, clínicas de fertilidade estão agora solicitando o laudo de embriões em mosaico e desenvolvendo seus próprios procedimentos para transferência desses embriões. Desenho do estudo, tamanho, duração: Um coorte de 1696 blastocistos de 553 ciclos de PGT-A foi retrospectivamente incluído. Os dados foram coletados de casos de PGT-A analisados no mesmo laboratório genético entre julho e dezembro de 2022. Os ciclos de PGT-A foram realizados em 17 clínicas de fertilidade diferentes da Argentina e todas elas, desde julho de 2022, começaram a solicitar o laudo de embriões em mosaico. Participantes/materiais, local e métodos: 1696 biópsias de trofectoderma de dias 5, 6 ou 7 blastocistos foram analisadas por NGS usando o kit Ion ReproSeq PGS, Ion Cheftm e Ion-S5 System (ThermoFisher Scientific). Um algoritmo personalizado foi aplicado para a interpretação dos resultados de PGT-A. Embriões em mosaico foram relatados como mosaico baixo (um ou dois cromossomos entre 30-50% da variação do número de cópias) ou mosaico alto (um ou dois cromossomos entre 50-70%). A idade materna varia de 22 a 44 anos. Ciclos de doadores de óvulos também foram incluídos. Principais resultados Dos 1696 blastocistos analisados, 1630 foram informativos (96,1%). 49,4% (805/1630) dos embriões eram euploides. Isso correspondeu a 366 ciclos de PGT-A (66,2%) para os quais pelo menos um embrião euploide estava disponível para transferência. Dos ciclos sem embriões euplóides (187/553, 33,8%), 30 pacientes (5,4%) têm pelo menos um embrião de baixo mosaico para transferência. As novas recomendações para o manejo de embriões em mosaico permitiram aumentar em 5,4% o número de ciclos de PGT-A com pelo menos um embrião para transferência durante esse período. De acordo com a idade materna, esses 30 ciclos correspondem a: 33,3% (10/30) mulheres < 38 anos e ciclos de doação de óvulos Limitações, razões para cautela: Os laboratórios moleculares que realizam PGT devem executar uma validação interna. Nosso algoritmo validado relata embriões em mosaico de baixo grau entre 30-50%. No entanto, outras plataformas poderiam ter sido validadas para diferentes faixas e esses resultados podem não ser comparáveis. Cinco gestações afetadas foram relatadas após a transferência de embriões em mosaico (Viotti, 2021), portanto, é preciso cautela. Implicações mais amplas dos resultados: Resultados de um curto período de tempo (seis meses) foram considerados para esta análise e os dados clínicos não foram possíveis de avaliar. Uma análise mais aprofundada é necessária para avaliar os benefícios clínicos em pacientes que procedem a transferências de embriões em mosaico. 46,7% (14/30) para mulheres entre 38-40 anos e 20% (6/30) para mulheres > 40 anos. O impacto foi observado principalmente na idade materna avançada. Para esse grupo de pacientes, onde poderia ser mais difícil repetir um ciclo de FIV e obter embriões euplóides, a possibilidade de transferir um embrião de mosaico baixo poderia ser sua única chance. Esses 30 ciclos de PGT-A não teriam resultado em nenhum embrião para transferência se políticas anteriores de mascaramento de embriões em mosaico (solicitadas pela clínica) fossem aplicadas. A possibilidade de transferência embrionária de baixo mosaico deve ser então revisada pela paciente e pelo médico.  

Incidência de diferentes alterações de ploidiais em embriões derivados de ovócitos com fertilização anormal (AFO)

Tecnologias melhoradas para a avaliação de embriões – Apresentação oral Terça-feira 27 de junho, 17:00 – 18:00 – Sessão 67 Autores: L. Girardi ,  F. Cogo , P. Zambon , I. Pergher , J.A. Castellòn , C. Patassini , C. Rubio   Pergunta do estudo Qual é a incidência de alterações de ploidia de novo em diferentes categorias de embriões fertilizados anormalmente analisados com SNP-array? Resposta resumida Com base no número de pronúcleos (NP) identificados, os embriões 0PN foram principalmente diploides, enquanto os embriões derivados de 1PN e >2PN apresentaram taxas aumentadas de ploidias alteradas. O que já se sabe O desenvolvimento recente de SNP-array e haplotipagem por abordagens de sequenciamento está contribuindo para expandir a utilidade clínica do teste genético pré-implantacional (PGT), incluindo a avaliação do nível de ploidia. Quando aplicada a embriões euplóides derivados de AFO, a identificação de constituição ploidia anormal (isto é, haploidia, triploidia ou tetraploidia) poderia resgatar embriões diploides viáveis considerados intransferíveis na FIV. No entanto, nenhuma evidência genética definitiva foi obtida mostrando a incidência de diferentes anormalidades ploidianas em cada categoria de blastocisto derivado da AFO. Aqui apresentamos 4 anos de experiência na aplicação clínica de um protocolo validado baseado em SNP-array e algoritmo feito sob medida para detectar defeitos ploidiais em embriões derivados de AFO. Desenho do estudo, tamanho, duração Estudo observacional prospectivo avaliando a incidência de configurações ploidiais alteradas em blastocisto derivado da OA. Após a verificação de NP, as amostras de AFO foram divididas da seguinte forma: ausência de pronúcleos observados (0PN), monopronucleares (1PN), mais de dois pronúcleos observados (2,1PN, com um NP adicional menor e 3PN). A classificação genética combinando PGT-A e análise de ploidia foi realizada no laboratório Igenomix Itália entre maio de 2019 e janeiro de 2023 em 133 embriões derivados de AFO (44 0PN, 59 1PN, 30 >2PN). Participantes/materiais, local, métodos Estudo multicêntrico envolvendo 293 pacientes consentidas com idade materna avançada (média=38,6±3,9) submetidas à PGT-A em MDA-WGA utilizando kit Ion ReproSeq e IonTorrent S5 (ThermoFisher). O teste de ploidia baseado em SNP-array foi realizado usando o kit HumanKaryomap-12 e NextSeq550 (Illumina). O algoritmo proprietário foi baseado na FAA genômica obtida: as FAB esperadas eram 1, 0,5 ou 0 para diploides, 1 ou 0 para haploides e 1, 0,66, 0,33 ou 0 para triploides, conforme determinado pela frequência de cada alelo para 300000 locos de SNPs. Principais resultados e o papel do acaso A validação pré-clínica do teste de ploidia baseado em SNP-array incluiu 26 amostras com status de ploidia e cariótipo conhecidos: 7 rebiópsias triploides, 7 sobras de haploides e 12 linhagens celulares. Além disso, a comparação entre plataformas de 72 diploides, 9 triploides e 8 embriões haploides analisados com uma abordagem alternativa de NGS-alvo, validada pela Igenomix, mostrou 100% (IC95%=95,94%-100%) de concordância. Neste estudo, um total de 318 embriões derivados de AFO foram coletados para análise de PGT-A para diferentes indicações. Destes, 58,2% (n=185/318;IC95%=52,54-63,66) resultaram como aneuploides. Os 133 blastocisto derivado de AFO euplóide restantes foram submetidos à avaliação de ploidia baseada em SNP-array. Blastocistos derivados de 0NP (n=44/133) foram diploides em 93,2% (n=41/44;95%IC=81,34-98,57) dos casos; apenas 4,5% (n=2/44;95%IC=0,56-15,47) eram haploides e 2,3% (n=1/44;95%IC=0,06-12,02) poliploides. Os blastocistos derivados da PN apresentaram todas as possíveis configurações de ploidia nestas proporções: 59,3% (n=35/59;95%IC=45,74-71,93) haploides, 35,6% (n=21/59;95%IC=23,55-49,13) diploides e 5,1% (n=3/59;95%IC=1,06-14,15) poliploides. Finalmente, no grupo de AFO onde mais de 2PN foram observados (2,1PN ou 3PN), o NP adicional resultou em 66,7% (n=20/30;95%IC=47,19-82,71) de configurações poliploides, os 33,3% restantes (n=10/30;95%IC=17,29-52,81) foram diploides. Não foram obtidos resultados haploides nesta categoria. O teste do qui-quadrado mostrou correlação global significativa entre a categoria NP e as configurações de status de ploidia (p<0,05). Coletivamente, a avaliação ploidiana de 133 embriões derivados de AFO, permitiu o uso clínico de 72 embriões euplóides/diploides adicionais que não seriam considerados para transferência.  Limitações, razões para cautela O protocolo de avaliação da ploidia não foi testado para distinguir triploides de tetraploides. A origem parental de cada conjunto cromossômico não pode ser determinada sem a análise do DNA parental. A forma de realizar a verificação da NP pode ter afetado a classificação da AFO. Em estudos futuros, nos concentraremos na avaliação dos resultados clínicos após a transferência de embriões euploides/diploides. Implicações mais amplas dos resultados Um número alterado de pró-núcleos é preditivo do estado ploidia alterado correspondente, enquanto a categoria 0NP não representa uma indicação clara para a avaliação da ploidia. No entanto, uma proporção significativa de embriões euplóides/diploides pode ser resgatada de todos os tipos de AFO, potencialmente aumentando a chance geral de alcançar um bebê nascido vivo  

O endométrio fino está associado a maior risco de ter uma janela de implantação deslocada (WOI)

Tema do pôster: Endometriose e Distúrbios do Endométrio – Número do pôster: P-355 Autores

3. Valbuena Perilla1, J.A. Castellón2, M. Gómez3, I. García3, C. Simón4,5,6, M. Ruiz-Alonso3. ^{1Igenomix, R e D,} Paterna, Espanha. ^{2Igenomix R&D, Departamento Médico, Valência, Espanha. 3Igenomix SL,} Departamento EndomeTRIO, Valência, Espanha.  ^{4Fundação Carlos Simon, Presidente, Valência, Espanha. 5Universidade de Harvard, Beth Israel Deaconess Medical} Center, Boston, Estados Unidos da América  ^{6Universidade de Valência, Obstetrícia e} Ginecologia, Valência, Espanha.

Questão de estudo: O endométrio fino (<6 mm) está associado a um estado de receptividade anormal? Resposta resumida: O endométrio fino (<6 mm) está significativamente associado a uma WOI deslocada. O que já se sabe: A mensuração da espessura endometrial pela ultrassonografia (US) vaginal 2D é uma prática rotineira nas Técnicas de Reprodução Assistida (TRA). O endométrio fino (<6 mm) está associado a pior resultado reprodutivo; no entanto, a razão potencial é desconhecida. Desenho do estudo, tamanho, duração: Estudo de coorte retrospectivo incluindo 25.888 pacientes em que o revestimento endometrial foi medido por Ultrassonografia 2D no dia anterior à suplementação de progesterona em ciclos de HRT para transferências embrionárias de embriões previamente congelados e a Análise de Receptividade Endometrial (ERA) foi realizada após 5 dias da administração de progesterona. A espessura endometrial foi classificada em <6 mm, 6-12 mm ou >12 mm; os resultados do ERA foram considerados como WOI (pré-receptivo, pós-receptivo, proliferativo e tardio-receptivo) que necessitam de uma transferência embrionária personalizada (pET). Participantes/materiais, local, métodos: A espessura endometrial foi medida de uma camada endometrial para outra em um exame transvaginal longitudinal no local de espessura máxima evidenciado pela US 2D. Para a análise de ERA, o RNA foi extraído e sequenciado por NGS. Em seguida, o preditor computacional ERA obteve o diagnóstico como WOI padrão ou deslocado. Principais resultados e o papel do acaso: Os resultados de Reprodução Assistida revelam que mulheres com endométrio fino (<6mm) apresentam incidência significativamente maior de Janela de Implantação deslocada (47,49%) do que 6-12mm (38,20%) (p=0,0038) e >12mm (39,75%) (p=0,026). Não foram encontradas outras diferenças.

Espessura endometrial (mm)	WOI padrão (%)	WOI deslocado (%)	TOTAL
<6	157 (52.51%)*	142 (47.49%)*	299
6-12	14552 (61.80%)	8994 (38.20%)	23546
>12	1231 (60.25%)	812 (39.75%)	2043
TOTAL	15940	9948	25888

*Diferença significativa em relação a outros dois grupos. Teste Qui-quadrado global para associação P= 0,002. Limitações, razões para cautela: Trata-se de um estudo retrospectivo, com limitações inatas de sua natureza. Implicações mais amplas dos resultados: O endométrio fino (<6mm) está associado a um maior deslocamento do WOI em comparação com o endométrio de revestimento normal ou hipertrófico. A espessura endometrial normal (6-12 mm) considerada “receptiva” não impede o estado de receptividade transcriptômica em 38,20% dos casos. Esse achado deve ser considerado quando a transferência embrionária é planejada.